1. 细胞爬片；
2. PBS清洗标本 3次，各1 min。
3. 冷丙酮4℃固定15min（或用4%多聚甲醛室温固定10~20min）；
4. 空气干燥5min，PBS漂洗3min，3次；
5. 细胞通透：0.5% Triton X-100（溶于PBS）通透细胞，室温15~30min（丙酮固定法不用此步骤）；
6. PBS漂洗2次，每次5min；
7. 3% H2O2去离子水室温孵育10min，PBS洗；
8. 正常山羊血清封闭，37℃孵育10~20min，甩掉封闭液，勿洗；
9. 加适当比例的一抗工作液孵育，4℃过夜或37℃ 1~2h；
10. PBS漂洗2次，每次5min；
11. 加入酶标二抗工作液，37℃，30-60min；
12. PBS漂洗2次，每次5min；
13. 加DAB显色剂显色（或AEC显色），镜下观察结果，适时终止；
14. 苏木素轻度复染；
15. 脱水透明。
16. 封片，中性树胶封片。
光学显微镜观察，拍片。图象评分。